小鼠生殖工程學技術——4取出低溫運輸的小鼠附睪尾部
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回到小鼠生殖工程凍存及培養試劑
◆材料
1、用CARD冷藏運輸試劑盒運輸的小鼠附睪尾2、FERTIUP?精子預孵培養基（Cosmo Bio Co., Ltd）3、mHTF4、電動移液器（GILSON PIPETMAN P-200）5、黃色槍頭（BM機器 Cat.No.110-96R）6、流動石蠟（nacalai Cat.No.26137-85）7、培養皿（Corning 35mm×10mm Cat.No.430588）8、解剖用的剪刀（夏目制造所 小直剪刀 Cat.No.B-12）9、解剖用的鉗子（夏目制造所 尖鉗子 Cat.No.A-45）10、濾紙11、CO2 培養箱
◆方法
1、 取出附睪尾的前30分鐘，制作精子預孵用培養皿（一個100μL FERTIUP?精子預孵培養基滴液），靜置在培養箱里。
2、 從泡沫箱里取出保溫瓶，再從保溫瓶內的紙盒里取出裝有附睪尾的0.2mL EP管。3、 打開0.2mL EP管的蓋子，取出附睪尾放在濾紙上，擦干附睪尾表面的凍存液。
※用剪刀和鉗子來除去附睪尾上留有多余的脂肪、組織、血液。
4、 在清洗用培養皿的mHTF滴液內清洗3次附睪尾，用濾紙擦干附睪尾上mHTF。※清洗用培養皿（3個大約100μL 的mHTF滴液），取出的附睪尾直接在此清洗。
5、 把附睪尾浸泡在精子預孵用培養皿的流動石蠟里。
6、 在附睪尾部采集精子，供體外受精用，采集的精子進行體外受精的步驟與用新鮮精子受精的步驟相同。
要點：在附睪尾的切口處采集精子時，如果精子難以露出，就往切口處再切深點，盡量采集更多的精子。
注意：用冷藏精子的受精培養基（CARD MEDIUM?)的調試方法與用新鮮精子受精的方法有差異，請詳細閱讀受精培養基的使用說明，準備受精用培養皿。
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