Nucleolus Bright Red試劑貨號：N512
核仁熒光染色試劑-紅色
Nucleolus Bright Red
商品信息
儲存條件：冷暗處保存
運輸條件：室溫
特點：
●高特異性核仁定位
● 可通過共聚焦定量細胞成像儀進行定量分析
● 兩種顏色可供選擇
選擇規(guī)格：
60 nmol
湊單關(guān)聯(lián)產(chǎn)品TOP5
NO.1.Cell Counting Kit-8 細胞增殖毒性檢測
NO.2. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST乳酸脫氫酶(LDH)檢測
NO.3. Fura2-AM細胞內(nèi)鈣離子檢測
NO.4. FerroOrange細胞亞鐵離子檢測
NO.5. Lactate Assay Kit-WST乳酸檢測
熒光特性
產(chǎn)品概述
Nucleolus Bright是一種選擇性與RNA結(jié)合并產(chǎn)生熒光的小分子熒光染料，只需在固定細胞中加入試劑即可成像。雖然Nucleolus Bright也會和在核仁以外存在的RNA反應(yīng)，不過核仁作為細胞內(nèi)RNA最多存在rRNA的產(chǎn)生場所，熒光尤為強烈。
成像時，通過與核染色試劑DAPI[產(chǎn)品貨號：D523]共染色，可以更清楚地確認(rèn)核仁。有關(guān)詳細信息，請參閱使用說明書中的實驗例。
原理
核仁是不帶膜的核內(nèi)結(jié)構(gòu)體，也是核糖體生物合成的起點。核仁中存在許多核糖體RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因轉(zhuǎn)錄以及合成加工的場所。由于蛋白質(zhì)合成的早期階段在核仁中進行，因此核仁的變化被認(rèn)為與多種細胞活動有關(guān)。核仁的形態(tài)變化已被公認(rèn)為判斷癌癥的指標(biāo)之一，近年來也有一系列的報道論述了核仁應(yīng)激與DNA損傷、自噬、病毒感染和細胞衰老的關(guān)系，因此核仁在這些方面的研究也受到越來越多的關(guān)注。
核仁染色試劑的比較
|
最大激發(fā)波長 |
最大發(fā)射波長 |
MeOH固定后染色 |
PFA固定后染色 |
活細胞染色 |
| Nucleolus Bright Green |
513 nm |
538 nm |
〇 |
〇 |
△※ |
| Nucleolus Bright Red |
537 nm |
605 nm |
〇 |
〇 |
△※ |
※希望通過活細胞進行評價時，請咨詢公司技術(shù)支持。
產(chǎn)品特點
特點1：清晰地觀察核仁
用4％ PFA或MeOH固定HeLa細胞后，用PBS洗凈后用1％ Triton X-100進行破膜處理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色
試劑 (DAPI) 并培養(yǎng)，然后用共聚焦熒光顯微鏡觀察。
結(jié)果證實DAPI染色的細胞核內(nèi) (藍色)有數(shù)個核仁存在。
<染色條件>
?PFA 固定
細胞在4％PFA室溫下浸泡5 min，再用Triton X-100在室溫下浸泡20 min，加入各種熒光探針后培養(yǎng)5 min。
?MeOH 固定
細胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室溫下浸泡20 min，加入各種熒光探針后培養(yǎng)5 min。
Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm
Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm
DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm
特點2：核仁定位
用4％PFA固定WI-38細胞后，用抗Fibrillarin一抗和熒光標(biāo)記的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色試劑
(DAPI) ，培養(yǎng)后，用落射式熒光顯微鏡 (Keyence，BZ-X710) 觀察。
結(jié)果證實Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red與核仁標(biāo)記物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。
＜檢測條件＞
Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm
Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm
DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm
Anti-Fibrillarin 抗體：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm
特點:3：與核仁相關(guān)的領(lǐng)域的報告示例
| 相關(guān)領(lǐng)域 |
概要 |
文獻 |
| 評論(衰老） |
關(guān)于各種參與細胞功能的核仁，
包括與癌癥和早老癥的已知關(guān)系、
特別是關(guān)于衰老的核仁功能。 |
V. Tiku, A. Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol., 2018, 28(8), 662. |
| 細胞衰老 |
由于與抑制衰老有關(guān)的蛋白質(zhì)缺損、
核仁數(shù)量的減少和核仁總面積的加。 |
H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148. |
| 細胞衰老 |
由于rRNA加工因子的枯竭導(dǎo)致
核仁肥大化，
同時SA-βGal和p16表達增加。 |
K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R. Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53 activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310. |
| 自噬 |
通過抑制RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄，
確認(rèn)自噬的誘導(dǎo)和核仁的形狀變化。 |
N. Katagiri, T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI: 10.1038/srep08903. |
衰老細胞的評價例
將不同傳代數(shù)的WI-38細胞用4％ PFA固定后，用PBS洗凈并用1％ Triton X-100進行破膜處理，然后加入Nucleolus Bright Green或
Red和核染色試劑 (DAPI)，培養(yǎng)后用共聚焦熒光顯微鏡觀察。
結(jié)果證實第3代細胞 (P3) 中的一個細胞核內(nèi)存在多個核仁，而第18代細胞 (P18) 中核仁變大并成為一體。
<染色條件>
細胞在4％ PFA室溫下浸泡5 min，再用Triton X-100在室溫下浸泡20 min，加入各種熒光探針后培養(yǎng)5 min。
＜檢測條件＞
Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm
Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm
DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm
產(chǎn)品實驗例
實驗例：通過共聚焦定量細胞成像儀進行定量分析
使用共聚焦定量細胞成像儀 (橫河電機株式會社 CQ1)對衰老細胞的定量分析。
將傳代數(shù)不同的WI-38細胞固定后，分別用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量細胞成像儀進行定量分析
通過圖像對核仁進行分析
用共聚焦定量細胞成像儀在405nm處拍攝細胞核圖像，在488nm處拍攝核仁體像，通過分析軟件Cell Pathfinder識別各個細胞核內(nèi)的核仁，并計算出其數(shù)量。
橫河電機CQ1拍攝條件
使用板：96孔板
物鏡：40倍
激發(fā)波長：
405nm（DAPI）：藍色
488nm（Nucleolus Bright Green）：綠色
視野：16視野
<解析圖像>
藍框線：核
紅框線：核仁
核仁數(shù)分析
在傳代數(shù)較多的細胞中，得到了1個細胞核中只有1個核仁的比例增加，而2個及以上核仁的比例減少的結(jié)果。該結(jié)果與下述論文中衰老的WI-38細胞中核仁數(shù)的減少(論文中的Table3)*1，以及通過SETD8敲低誘導(dǎo)衰老的細胞核仁的變化(論文中的Figure4D)*2得到了相同的結(jié)果。
*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.
*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.
常見問題Q&A
| Q1：可以染色活細胞嗎？ |
| A1：本試劑建議用于固定細胞染色，不建議用活細胞染色。如果您想用活細胞染色，請聯(lián)系我們的技術(shù)支持。 |
?
Bio-Rad伯樂官網(wǎng) |伯樂授權(quán)代理 |伯樂ddPCR| 伯樂Aminex| 伯樂層析填料色譜柱是專業(yè)的授權(quán)總代理區(qū)域代理經(jīng)銷平臺。
? 如需詢價，請加客服QQ：1749072012 、客服微信：jinshanbio，或發(fā)送郵件到1749072012@qq.com
? 平臺為生命科學(xué)研究相關(guān)領(lǐng)域提供一站式耗材試劑儀器解決方案和采購服務(wù)，數(shù)據(jù)資源基于CC協(xié)議。
? 本文地址：
http://www.gamefang.cn/thread-34601.htm
QQ:1749072012