Cellstain- PI試劑貨號(hào)：P346
3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘（3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide）
CAS號(hào)：25535-16-4
商品信息
儲(chǔ)存條件：0-5度保存，避光
運(yùn)輸條件：室溫
分子式：
C27H34I2N4
分子量：
668.39
特點(diǎn)：
●與死細(xì)胞DNA結(jié)合
●常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)
● 可與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用
選擇規(guī)格：
1 mg
細(xì)胞染色
湊單關(guān)聯(lián)產(chǎn)品TOP5
NO.1.Calcein-AM細(xì)胞質(zhì)染色
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II氧化型/還原型谷胱甘肽
NO.3. Amine Coupling Kit自組裝單分子膜SAM
NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit細(xì)胞凋亡檢測(cè)
NO.5. Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit細(xì)胞凋亡檢測(cè)
規(guī)格性狀
規(guī)格
特性：該產(chǎn)品為紅棕色粉末或固體，易溶于水和稀鹽酸。
水溶性：試驗(yàn)成功
NMR光譜：試驗(yàn)成功
產(chǎn)品概述
熒光染料PI（碘化丙啶）是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，英文全稱是Propidium Iodide。它是一種溴化乙啶的類似物，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。盡管PI不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。PI經(jīng)常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535nm和615nm。
熒光特性
λex=530 nm, λem=620 nm
操作說明
1.用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液制備10-50μMPI溶液。a）
2.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入體積為細(xì)胞培養(yǎng)基1/10的PI溶液。b）
3.將細(xì)胞在37oC下孵育10-20分鐘。
4.用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液清洗細(xì)胞兩次。
5.在帶有535 nm激發(fā)光和615 nm發(fā)射濾光片的熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。
a）由于PI可能致癌，因此在處理過程中必須格外小心。
b）或者您可以用1/10濃度的PI緩沖溶液代替培養(yǎng)基。
文獻(xiàn)
1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, “An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J. Histochem. Cytochem.,1980,28(11), 1224.
2) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”,Cancer Res.,1989,49, 3783.
3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, “Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms”,Cytometry,1991,12, 330.
4) C. Souchier, M. Ffrench, M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, “Methods for Cell Proloferation Analysis by Fluorescent Image Cytometry”,Cytometry,1995,20, 203.
5) T. Irino, T. Kitoh, K. Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M. Schuster and M. Osaka, “Establishment of Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase Expression”,Mol. Diagn.,2004,6, 217.
常見問題Q&A
| Q1:核染色中所用染料的特征和區(qū)別是什么？
|
| A1：
這里引入的染料具有通過與核酸相互作用而發(fā)出熒光或增加熒光強(qiáng)度的特性。
除熒光波長(zhǎng)以外的差異如下。
[EB]
它沒有堿基特異性，可與所有DNA和RNA結(jié)合。
它沒有活細(xì)胞的膜通透性，并且可以染色死細(xì)胞。
[PI]
像EB一樣，它沒有基礎(chǔ)特異性。它是一種更廣泛使用的染料，因?yàn)椴迦霑r(shí)它的熒光強(qiáng)度比EB高。
它沒有活細(xì)胞的膜通透性，并且可以染色死細(xì)胞。
[DAPI]
與雙鏈小槽結(jié)合。它與腺嘌呤-胸苷簇具有高度結(jié)合。
它沒有活細(xì)胞的膜通透性，并且可以染色死細(xì)胞。
[AO]
通過利用插入雙鏈時(shí)和與單鏈磷酸結(jié)合時(shí)熒光波長(zhǎng)不同的事實(shí)，可以在雙鏈和單鏈之間進(jìn)行區(qū)分。
它滲透到活細(xì)胞的細(xì)胞膜上。
[Hoechst33342，33258]
它與DNA的腺嘌呤胸苷部分特異性結(jié)合。
它是一種顏料，可以滲透到活細(xì)胞的細(xì)胞膜上并染色活細(xì)胞的DNA。 |
| Q2：細(xì)胞染料的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是多少。 |
| A2： |
| Q3:如何使用PI進(jìn)行核染色？ |
| A3:一個(gè)例子如下所示。根據(jù)細(xì)胞類型和觀察條件，考慮細(xì)胞固定和試劑濃度。
[使用示例①]
Vollenweider等人進(jìn)行了PI染色，并在熒光素激活的殺傷（LAK）細(xì)胞增殖試驗(yàn)中使用了熒光板讀數(shù)器進(jìn)行了測(cè)量。
此時(shí)的濃度為0.5 mg / mL PBS（-）。所用濃度為5μg/ mL檸檬酸鈉溶液，每孔100μL用于熒光染色。
·I.Vollenweider，P.Groscurth，J.Immunol.Methods，149，133（1992）。
[用法示例（2）]
（1）對(duì)于包含實(shí)體瘤或團(tuán)塊的樣品，請(qǐng)用0.02％tripsinEDTA處理。
在37°C下孵育30分鐘后，以1500 rpm進(jìn)行5分鐘，然后棄去上清液。
（2）在-20℃用50％甲醇固定后，以1500rpm進(jìn)行5分鐘，并棄去上清液。
（3）在-20℃下用30％甲醇洗滌后，以1500rpm進(jìn)行5分鐘，棄去上清液。
（4）用0.2 mol / L磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌后，以1500 rpm進(jìn)行5分鐘，并棄去上清液。
（5）每106個(gè)細(xì)胞RNase 0.2 mol / L磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）溶液（1 mg / mL）
加入0.2 mL，并在37°C下孵育30分鐘。
（6）用0.2 mol / L磷酸鹽洗滌后，以1500 rpm進(jìn)行5分鐘，并棄去上清液。
（7）加入10 mL PI溶液（50μg/ mL），在黑暗中于4°C染色2小時(shí)。
?醫(yī)學(xué)院出版《流式細(xì)胞儀入門》 |
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