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海博生物鱟試劑一級代理授權代理

鱟試劑( Tachypleus Amebocyte Lysate , TAL )是海洋節肢動物鱟血液中的阿米巴細胞( Amebocyte )經裂解液或機械方法裂解細胞后提取得到的一種細胞溶解物。鱟試劑中含有特異性的凝固酶,在一定條件下可被極微量的內毒素激活,當凝固蛋白原的精氨酸18-蘇氨酸19和精氨酸46-甘氨酸47之間的肽鍵被切斷后,則游離出含有28個氨基酸的C肽片段和凝固蛋白分子兩端的A肽和B肽片段,并通過二硫鍵聯結聚合成凝膠,其形成凝膠的速度和堅固程度與鱟試劑中凝固酶含量及內毒素濃度成正比。根據鱟試劑的這一特殊性質,可以方便、敏感地快速定性或定量檢測檢品中的內毒素含量。

鱟阿米巴細胞溶解物

若干ml

20mmol/L氯化鈣溶液

若干ml

154mmol/L氯化鈉溶液

若干ml

  1. 采血:新鮮健康成年的中國鱟(Tachypleus tri-denatus Leach),頭胸-腹關節處以碘酒、酒精(70%)常規消毒,用16號獸用針頭或特制玻管行心臟穿刺,使鱟血流入盛有抗凝劑(20mmol/L茶堿或25mmol/L乙二胺四乙酸鈉, ED-TA比例為1:1(v/v)的無熱原收集瓶中;

  2. 離心和洗滌:采血后立即離心,600g,5分鐘,棄藍色上清，見白色粉末狀沉淀,加3.1%NaCI洗滌、離心兩次,600g,5分鐘,再次洗滌后進行細胞計數;

  3. 裂解:將5×104/mm3細胞懸液100ml沉淀后,其壓積細胞加入10ml裂解液(154mmol/L NaCl ,50mmol/L Tris-HCI pH7.1±0.3,10~100mmol/L CaCl2),用力振蕩后置4℃冰箱見24~72小時,取出2000g離心,15分鐘,所得上清即為粗制鱟試劑;

  4. 精制:氯仿抽提后加20mmol/L氯化鈣和154mmol/L氯化鈉鹽析,作敏感度檢測后分裝凍干保存。