品牌: biomics
公司: 百奧邁科生物技術有限公司
提供商: Biomics Biotech 服務名稱: 實時熒光定量PCR技術服務(普通基因,siRNA,microRNA ) 規格: 180元/樣
規格: | 產品價格: | ¥180.0
規格: | 180元/樣
產品價格: | ¥180.0 產品詳情請聯系金山科研平臺微信:jinshanbio
實時熒光定量PCR(Real Time PCR,qRT-PCR)避免了傳統PCR 以終產物檢測定量產生的偏差,提高實驗的重復性。與常規PCR 相比,實時熒光定量PCR 具有特異性更強、有效解決PCR 污染問題、自動化程度高等特點,已成為國際公認的核酸分子定量的標準方法。該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA 表達量的變化;比較不同組織的mRNA 表達差異;驗證基因芯片,siRNA 干擾的實驗結果。它涉及到DNA或RNA 樣品制備,反轉錄及PCR 反應等一系列重要的分子生物學過程。
配套產品:qPCR實時熒光定量一步法試劑盒BK2100BK BK2100
設計目的片段和內參基因的qPCR引物:利用Primer5.0等軟件設計PCR引物及探針。我們公司免費為客戶設計引物和探針。
SYBR Green 法1)建立以下反應體系試劑(SYBR Green法)量總RNA 根據實驗qPCR mix(包含MLV、Hot-start Taq、dNTP等 ) 終濃度為1×SYBR Green I solution 終濃度為1×上游引物,10μM 終濃度:~200 nM下游引物,10μM 終濃度:~200 nMMgCl2 根據實驗RNase-Free H2O To 25.0 μl
2) PCR 反應條件如下:步驟 循環數 步驟溫度 時間逆轉錄 1 1 42 oC 30 min失活MLV,激活Taq 1 1 95 oC 10 min1 95 oC 15 sec2 X oC* 實時熒光定量PCR 40 30 sec3 72 oC 30 sec*與引物的Tm 相關3) 取5μl PCR 產物跑1.5%瓊脂糖凝膠電泳,或做溶解曲線,檢測PCR 產物的特異
熒光圖譜
Taqman 法1) 建立以下反應體系試劑(Taqman法) 量總RNA 根據實驗qPCR mix(包含MLV,Hot-start Taq、dNTP等 )終濃度為1×Taqman Probe 根據實驗上游引物,10μM 終濃度:~200 nM下游引物,10μM 終濃度:~200 nMMgCl2 根據實驗RNase-Free H2O To 25.0 μl
2) PCR 反應條件如下:步驟 循環數 步驟溫度 時間逆轉錄 1 1 42 oC 30 min失活MLV,激活Taq 1 1 95 oC 10 min1 95 oC 15 sec實時熒光定量PCR 402 60 oC* 1 min3實驗完畢之后,將數據導入到Excel 中進行數據分析。4.結果分析:利用ΔΔCt 法,相對定量,將目的基因的表達與看家基因的表達對比,獲得沉默效果。
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