高效RIPA裂解液(組織/細胞)-蛋白提取/定量-蛋白與免疫
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高效RIPA裂解液(組織/細胞)| 別名 | 蛋白提取試劑盒 |
|---|---|
| 英文名稱 | RIPA buffer(high) |
| 儲存條件 | 2-8℃，避光保存 |
| 外觀（性狀） | 黃色澄清液體 |
| 單位 | 瓶 |
本品為高效組織細胞裂解液。主要用于從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。組織活細胞本產品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml），PMSF請于-20℃保存。
使用說明
如發現RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。根據使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。混勻備用 （PMSF現用現加）。
1、樣品前處理：
a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
c)對于組織樣品： 把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)。
用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
2、后處理：
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項 ：
本試劑為強烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，造成細胞裂解液粘稠，此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。
如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。
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