全蛋白提取試劑盒（中）-蛋白提取/定量-蛋白與免疫
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全蛋白提取試劑盒（中）| 儲存條件 | -20℃ |
|---|---|
| 單位 | 盒 |
全蛋白提取試劑盒（中）用于哺乳動物組織和細胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為溫和，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎(chǔ)研究實驗，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。
產(chǎn)品組成:
| 規(guī)格 | 儲存條件 |
裂解液（中） | 100 ml | 2-8 oC |
磷酸酶抑制劑（100x） | 1ml | -20 oC |
蛋白酶抑制劑（100x） | 1 ml | |
PMSF（100x） | 1ml |
操作方法:
1、組織總蛋白的提取 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用； 稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作； 將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min； 吸取上清至新的管中； 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。 （提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。) 2、細胞總蛋白的提取 裂解液的用量：107個細胞需要裂解液1ml； 貼壁細胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液；在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞， 將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min 懸浮細胞：4 oC 400g離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數(shù)加入裂解液， 渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復3-4次； 裂解完畢之后，將細胞裂解液4 oC 12000g離心30min； 將上清移入新的EP管中； 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。 （提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)
注意事項： 實驗過程，所有試劑都要需要預冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境； PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因為PMSF在水溶液中會快速降解；
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