熒光蛋白上樣緩沖液-蛋白電泳/marker-蛋白與免疫
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熒光蛋白上樣緩沖液| 別名 | 立顯蛋白電泳條帶顯色劑 蛋白熒光buffer 熒光上樣緩沖液 |
|---|---|
| 英文名稱 | Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE |
| 儲存條件 | -20℃ |
熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進行預染，標記上熒光。實驗完成以后，凝膠中或轉膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數字成像系統進行觀察和分析，無需染色脫色。 熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩定性強，背景低。可對所有蛋白進行染色，不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中，游離的染料分子與溴酚藍的遷移速率一致，跑膠結束時 移至凝膠末端，背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達純化以及Western blot的SDS-PAGE。 使用步驟 1. 請在使用前根據管壁標簽上的體積加入resuspension buffer重懸。Resuspension buffer在4℃可能會有沉淀產生，室溫下放置至沉淀消失。 2. 將用上樣緩沖液處理的蛋白樣品與待電泳蛋白樣品1:2混合。比如，3ul 上樣緩沖液 + 6ul 蛋白樣品。 3. 90-100℃加熱上述處理的樣品混合液5分鐘。細胞或組織樣品，加熱時間延長至10分鐘。確保加熱溫度>90℃使樣品充分受熱。 ? 大部分預制膠（Bis-Tris體系除外）可以直接進行下一步。Bis-Tris體系的預制膠(如Life Technology)，需加入20%已處理樣品體積的Enhancing buffer。比如，10ul已處理的樣品需加入2ul Enhancing buffer。 4. 樣品可以上樣進行電泳了（無需再加Loading Buffer處理）。 5. 電泳結束后，將凝膠放至透射儀上進行觀察和拍照。透射儀可以是紫外燈，藍光LED燈或其它凝膠成像系統。如果光源在可見光波長范疇的無需剝膠，因為可見波長范圍內的光可以穿透玻璃或塑料材質的膠板。 6. （可選的）如果有需要，經熒光蛋白上樣緩沖液處理的凝膠仍可進行考染。按標準的考染步驟進行即可。 注意事項： 1. 請勿使用該上樣緩沖液處理預染的或預處理的蛋白分子量標準。這些產品與熒光蛋白上樣緩沖液不兼容。 2. 靈敏度影響因素：高pH（大于7）不會影響染色，低pH則會降低染色的效率，如果樣品的pH低于5，建議將pH調整至7以上。 3. 熒光蛋白上樣緩沖液不適合在如下SDS-PAGE實驗中使用：切割蛋白條帶用以測序、質譜分析或抗體制備。
4. 建議-20保存，如果室溫放置2-3周，則可添加新的DTT，蛋白條帶會重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP(2 mM)， 效果也很好。
規格：每個規格包含3管：Instant-Bands, Resuspension Buffer 和Enhancing buffer。只有使用Bis-tris 膠時才需要加Enhancing Buffer.
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