-SABC(兔IgG)-FITCkit-切片與免疫組化-蛋白與免疫
2023-10-29
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SABC(兔IgG)-FITC kit品牌： | 貨號(hào)：SA0023| 英文名稱 | SABC(Rabbit IgG)-FITC Kit |
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產(chǎn)品內(nèi)容：
封閉液（5% BSA） 10ml Bio-羊抗兔IgG濃縮液 100ul SABC-FITC濃縮液 100ul 稀釋液 30ml 抗熒光衰減封片劑 10ml 保存： 如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，請(qǐng)將所有試劑存放于-20℃，如經(jīng)常使用，可將封閉液，稀釋液和抗熒光衰減封片劑存放于2-8℃以方便使用。 產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本試劑盒適合于一抗為兔IgG來源的免疫組化實(shí)驗(yàn).，F(xiàn)ITC熒光檢測(cè)。 SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生物素有極高的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大約可形成一百個(gè)左右的FITC和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的FITC將保證SABC具有很高的敏感性。 操作步驟：（微量試劑請(qǐng)離心后使用） 以石蠟切片熱修復(fù)為例1. 切片常規(guī)脫蠟至水。2. 可選步聚： a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10min后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.4）洗滌1-2次。 b、酶消化，滴加消化液，37℃10min，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3次。 c、跳過此步，直接進(jìn)入下一步。3. 滴加5% BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 免洗。4. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗，37℃ 孵育1h左右或20℃ 2h左右，也可4℃過夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2min（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間）。5. 根據(jù)使用量,用稀釋液將Bio-羊抗兔IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗兔IgG濃縮液,混勻即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2min。6. 根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-FITC濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-FITC濃縮液，混勻即成SABC-FITC工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液，20-37℃孵育30min(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗滌4次，每次5min。7. 滴加抗熒光衰減封片劑封片。熒光顯微鏡觀察。 對(duì)于細(xì)胞爬片，固定后，PBS漂洗兩次，再用0.5% Trxiton X-100室溫孵育20min， PBS漂洗兩次，接上述第3步。 對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，再接上述第2步。 注意事項(xiàng)： 如果背景過高，在SABC反應(yīng)之后，用加有0.01%—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后封片觀察。
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