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SABC(小鼠IgG)- FITC(POD)kit品牌: | 貨號:SA0015
英文名稱 | SABC(Mouse IgG)- FITC(POD) Kit |
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產(chǎn)品內(nèi)容:
封閉液(5% BSA) 10ml Bio-羊抗小鼠IgG濃縮液 100ul SABC-FITC濃縮液 100ul SABC-POD濃縮液 100ul 稀釋液 30ml 20×DAB顯色液A 1ml 20×DAB顯色液B 1ml 抗熒光衰減封片劑 10ml 保存: 如果長時(shí)間不使用,請將所有試劑存放于-20℃,如經(jīng)常使用,可將封閉液,稀釋液, 20×DAB顯色液B和抗熒光衰減封片劑存放于2-8℃以方便使用。 產(chǎn)品簡介: 本試劑盒適合于一抗為小鼠IgG來源的免疫組化實(shí)驗(yàn). DAB及FITC顯色。 SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計(jì)的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對生物素有極高的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(PI=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大約可形成一百個(gè)左右的過氧化物酶或者FITC和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶與FITC將保證SABC具有很高的敏感性。 操作步驟:(以石蠟切片熱修復(fù)為例)1. 切片常規(guī)脫蠟至水。3%H2O2室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶(如果FITC,可省掉此步)。蒸餾水洗3次。 2. 熱修復(fù)抗原:將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。3. 滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 免洗。4. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗,37 ℃ 1小時(shí)孵育左右或20℃ 2小時(shí)左右,也可4℃過夜。PBS(pH7.2-7.4)洗滌3次,每次2分鐘(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說,陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間;背景過高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間)。5. 根據(jù)使用量,用稀釋液將bio-羊抗小鼠IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul bio-羊抗小鼠IgG濃縮液,混勻即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 處理30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗滌3次,每次2分鐘。如果用熒光觀察,請接步驟6、7,如果用DAB顯色,請直接轉(zhuǎn)至步驟8。6. 根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-FITC濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-FITC濃縮液,混勻即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分鐘(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗滌4次,每次5分鐘。7. 滴加抗熒光衰減封片劑封片。熒光顯微鏡觀察。8. 根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液,混勻即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗滌4次,每次5分鐘。9. DAB顯色:根據(jù)用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B ,混勻后加至切片。室溫顯色, 鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。10. 蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。 對于細(xì)胞爬片: 常規(guī)固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5%Txiton X-100室溫20分鐘,PBS漂洗兩次,3%H2O2(如果用FITC,剛可省掉此步)處理15分鐘;PBS漂洗兩次,下接上面第4步。對于冰凍切片: 固定后,可用PBS漂洗兩次,再接上面第二步。 注意事項(xiàng): 如果用DAB染色背景過高,在SABC反應(yīng)之后,DAB顯色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,然后DAB顯色。 如果用FITC觀察背景過高,在SABC反應(yīng)之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗滌2次,然后封片觀察。 因?yàn)槊庖呓M化指標(biāo)眾多,標(biāo)本不一,此步驟僅作參考。

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