TriQuickReagent總RNA提取試劑-核酸提取/純化-分子生物學
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| 別名 | TriQuick Reagent總RNA提取試劑 Trizol |
|---|---|
| 英文名稱 | Triquick Reagent (Trizol Substitute) |
| 儲存條件 | 4℃避光保存，保質期12個月 |
| 外觀（性狀） | 液體 |
| 單位 | 盒 |
產品簡介： 本試劑是一種通用的總RNA提取試劑，適用于動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提，可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase保護實驗，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提取（10平方厘米細胞或100mg組織）。 操作說明: 自備新開封或專用氯仿，異丙醇，75%乙醇，DEPC處理水。 1. 細胞裂解或組織勻漿： 1)貼壁細胞：吸盡培養液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）細胞加入1 ml TriQuick Reagent,使其覆蓋培養細胞，再用吸管或加樣器吹打2~3次，細胞應完全裂解，然后轉移至離心管中。 2)懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每五百萬至一千萬（5×106-1×107）動植物或酵母細胞，或一千萬 (1×107)細菌，加入1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加樣器吹打，使其完全裂解。某些酵母和細菌如裂解不充分，可用勻漿器勻漿，以確保其完全裂解。轉移至離心管中。 3)組織：先將組織剪切成小塊，放入玻璃勻漿器內。冷凍組織可在研缽中研磨勻漿。每50-100mg組織加入1ml TriQuick Reagent ，勻漿至完全裂解。轉移至離心管中。 裂解產物應呈澄清的透明粘稠液體。室溫放置5分鐘。對于多糖、蛋白等雜質豐富的組織樣品，勻漿后仍會存留有不溶物質，可12000g 4℃離心10分鐘，然后吸取上清至一新的離心管中。 2. 分離：在裝有裂解物的離心管中加入0.2倍體積的氯仿（1 ml TriQuick Reagent 加入0.2 ml氯仿），振蕩器上充分振蕩混勻30秒，室溫放置2-3分鐘。12000g 4℃離心10分鐘，然后吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中，每毫升TriQuick Reagent 約可吸取0.5-0.6 ml。有機相和中間層含有DNA和蛋白質，應避免觸及。 3. 沉淀：按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5 ml異丙醇，顛倒數次混勻，室溫沉淀10分鐘。12000g 4℃離心10分鐘，在管底可見RNA沉淀。棄上清，按每毫升TriQuick Reagent 加入1 ml 75%乙醇，輕輕顛倒混勻，以清洗RNA沉淀。12000g 4℃離心2分鐘，棄去液體，小心勿丟棄RNA沉淀。室溫倒置晾干5~10分鐘。 4. 溶解：加入適量DEPC處理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。 注意事項： 1，RNA提取過程中所用器皿、離心管、吸頭等應保證無污染無RNA酶。操作中應小心，防止外源性RNA酶污染樣品導致RNA樣品降解。 2，試劑中含有酚等有害物質，注意個人防護。
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