小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)——10復(fù)蘇玻璃化冷凍后的胚胎的步驟
平臺授權(quán)一級代理，咨詢微信：jinshanbio
小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)——10復(fù)蘇玻璃化冷凍后的胚胎的步驟回到小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)指南目錄
回到小鼠生殖工程凍存及培養(yǎng)試劑
◆材料
１、 0.25 M 蔗糖２、 KSOM/AA３、 培養(yǎng)皿（Corning 35mm X 10mm Cat.No.430588）４、 藍(lán)色槍頭（BM器材 Cat.No.111-R100S）５、 微管６、 自動移液器（GILSON PIPETMAN P-1000）７、 解剖針（夏目制造所 Broach holder Cat.No.E-14）８、 酒精燈（或者臺式微型煤氣燃燒器 Cat.No.RK4102）９、 CO2培養(yǎng)箱（37°C 5% CO2 95% air）
◆步驟
準(zhǔn)備清洗胚胎用的培養(yǎng)皿和蔗糖溶液
１. 首先制作清洗復(fù)蘇后胚胎的培養(yǎng)皿，靜置在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)30分鐘以上，穩(wěn)定內(nèi)部氣體。
２. 預(yù)先在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)加熱0.25 M 蔗糖溶液。
胚胎的復(fù)蘇
1. 從液氮儲存器內(nèi)取出凍存的EP管后，立刻打開蓋子，倒掉EP管內(nèi)的液氮，在室溫下靜置30秒。
2. 用自動移液器把0.9ml已預(yù)熱到37°C的0.25 M 蔗糖溶液添加進(jìn)EP管內(nèi)，在蔗糖溶液完全溶進(jìn)凍存液前要迅速移液（10次左右）。
* 融解后的凍存液在常溫下細(xì)胞毒性很強(qiáng)，因此需要迅速往EP管內(nèi)添加0.25 M 蔗糖稀釋凍存液。
移液
１. 如下圖所示，首次移液需迅速把0.9mL 0.25 M 蔗糖溶液轉(zhuǎn)移至EP管內(nèi)加熱（請注意如果槍頭的尖端接觸凍存液，槍頭內(nèi)的蔗糖溶液會凍結(jié)并阻塞在槍頭的尖端）。
２. 第二次以后的移液，就按照下圖藍(lán)色箭頭所示小幅度移液。
此外，第二次以后的移液，以免損壞胚胎，應(yīng)小心且迅速有序地移液加熱胚胎。（移液的速度請參考以下視頻）
３. 使用自動給移液器，將凍存液和蔗糖溶液的混合溶液移至培養(yǎng)皿上，接著用0.4~0.5mL的0.25 M 蔗糖溶液清洗EP管。
注意：移液時，盡量避免產(chǎn)生氣泡。在混合溶液移至培養(yǎng)皿上時，如果溶液表面產(chǎn)生氣泡，氣泡會阻礙取回胚胎，此時可用酒精燈加熱解剖針的尖端，然后刺破氣泡。
胚胎復(fù)蘇時移液要點(diǎn)：請注意，移液過程中如果槍頭內(nèi)有氣泡，混合溶液移至在培養(yǎng)皿后，溶液表面產(chǎn)生的大量氣泡會導(dǎo)致難以在顯微鏡下觀察胚胎，無法取回胚胎。
４. 直接從混合溶液里取出胚胎，小心地導(dǎo)入預(yù)先制作好（清洗前30分鐘以上開始準(zhǔn)備）、清洗胚胎的培養(yǎng)皿上的KSOM/AA滴液里，靜置在培養(yǎng)箱內(nèi)10分鐘。
靜置10分鐘后
５. 用剩下的KSOM/AA滴液清洗胚胎兩遍。
參考文獻(xiàn)
【1】 Nakao K., Nakagata N., and Katsuki M. 1997. Simple and effcient procedure for cryopreservation of mouse embryos
by simple vitrification. Exp. Anim. 46: 231-234.PDF
授權(quán)一級代理請認(rèn)準(zhǔn)金山科研平臺，產(chǎn)品價格和貨期請咨詢微信：jinshanbio ，詢價請加微信：jinshanbio
? 如需詢價，請加客服QQ：1749072012 、客服微信：jinshanbio，或發(fā)送郵件到1749072012@qq.com
? 平臺為生命科學(xué)研究相關(guān)領(lǐng)域提供一站式耗材試劑儀器解決方案和采購服務(wù)，數(shù)據(jù)資源基于CC協(xié)議。
? 本文地址：http://www.gamefang.cn/thread-59315.htm
特別聲明：以上內(nèi)容(如有圖片亦包括在內(nèi))來源于授權(quán)廠家或網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請聯(lián)系客服刪除，本平臺不提供信息校正和存儲服務(wù)。
Notice: The content above (including the pictures if any)comes from authorized manufacturers or networks. In case of infringement, please contact to delete it. This platform does not provide information storage services.
QQ:1749072012