Monarch?高分子量DNA提取試劑盒（組織）–NEB酶試劑NewEnglandBiolabs
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產品資料 – 核酸純化 – 基因組DNA提取Monarch? 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織） 收藏 貨 號規(guī) 格 價 格(元) 北京庫存上海庫存廣州庫存成都庫存蘇州庫存#T3060L50 preps5,399.00 無無無無無#T3060S5 preps899.00 有無無無無Download: isoschizomers|compatible ends|single letter code特性
· 用于從組織、細菌和其它樣品（酵母、昆蟲、兩棲動物）中提取高分子量 DNA
· 從軟組織和細菌中提取純化的 DNA 片段大小達到 Mb 范圍
· 對于一些樣品，通過改變裂解過程中的離心速度，調節(jié)提取 DNA 的片段大小
· 操作流程簡單、便捷（組織和細菌樣品 90 分鐘）
· 獲得的 DNA 產量、純度和完整性極佳
· 快速、高效的洗脫
· 是長片段測序的理想選擇
· 包含 RNase A 和蛋白酶 K，以及微管研棒便于樣品勻漿
產品說明Monarch® 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）為從組織、細菌及其它樣品（包含酵母、昆蟲和兩棲動物）中提取完整的高分子量（HMW）gDNA 提供了快速的操作流程。針對于組織的提取方案為：首先使用研棒勻漿和蛋白酶 K 攪拌裂解樣品，然后進行蛋白質去除，并將提取的 DNA 附著到大玻璃珠的表面。如果提取樣品為細菌，則需要在蛋白酶 K 消化之前，使用溶菌酶對細菌細胞壁進行充分裂解。根據(jù)標準流程提取的 DNA 在 50-250 kb 之間，如果將離心速度降到最低，提取的 DNA 片段可達 Mb 范圍。純化后的 DNA 產量和純度極高，且?guī)缀跬耆缓?RNA。組織和細菌樣品提取時間為 90 分鐘。組織和細菌 A260 / A280 檢測純度為 1.8-1.9，組織 260/230 檢測純度為 2.1-2.5，細菌 260/230 檢測純度為 2.1-2.2。純化后的 HMW DNA 適用于多種下游應用，包括長片段測序（Oxford NanoporeTechnologies®和 PacificBiosciences®），光學圖譜（BionanoGenomics®）和 Linked-Reads 基因組組裝。
圖 1：使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒從組織中提取純化 HMW DNA 的操作流程
圖 2：Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）可從多種樣品中高效提取純化高質量的 HMW DNA
使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）提取 HMW 基因組 DNA。提取樣品為：凍存大鼠腎臟 10 mg、新鮮小鼠肝臟 10 mg、凍存小鼠大腦 20 mg、新鮮小鼠肌肉 20 mg、凍存大腸桿菌 2 x 109、蠟樣芽孢桿菌 2 x 108、新鮮非洲爪蟾 4 mg、新鮮釀酒酵母 3.8 x 108 和凍存埃及埃及斑蚊 15 mg。參照試劑盒說明書操作，離心速度為 2000 rpm。釀酒酵母使用經調整的操作流程。從平行實驗樣本中分別取 500 ng DNA 產物通過 PFGE 分離（在 BioRad® CHEF-DR® III 系統(tǒng)上，使用 1％ 瓊脂糖凝膠，6 V / cm，13℃ 電泳 20 小時，切換時間為 0.5-94 秒）。各樣品的產量和純度見下表標注。分子量標準為 Lambda PFG Ladder（NEB＃N0341）。
圖 3：在從組織和細菌中提取 HMW 基因組 DNA 的裂解過程中，使用不同的離心速度可調節(jié)提取片段長度
使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）提取純化 HMW 基因組，測試樣品為小鼠腎臟（10 mg，圖 3A）和大腸桿菌 NEB10 beta（1 x 109 細胞，圖 3B）。在裂解步驟中，按照圖中標注的速度離心樣品，以控制 DNA 的片段化。從平行實驗樣本中取等量的 DNA 產物（小鼠腎臟：300 ng；大腸桿菌：500 ng）通過 PFGE 分離（在 BioRad® CHEF-DR® III 系統(tǒng)上，使用 1％ 瓊脂糖凝膠，6 V / cm，13℃ 電泳 20 小時，切換時間為 0.5-94 秒）。分子量標準為 Lambda PFG Ladder（NEB＃N0341）。各樣品的產量、純度和 DIN 值見下表標注。
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