Monarch?高分子量DNA提取試劑盒（細(xì)胞和血液）貨號(hào)#T3050LNEB酶試劑NewEnglandBiolabs
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產(chǎn)品資料 – 核酸純化 – 基因組DNA提取Monarch? 高分子量 DNA 提取試劑盒（細(xì)胞和血液） 收藏 貨 號(hào)規(guī) 格 價(jià) 格(元) 北京庫(kù)存上海庫(kù)存廣州庫(kù)存成都庫(kù)存蘇州庫(kù)存#T3050L50 preps4,799.00 無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)#T3050S5 preps839.00 無(wú)無(wú)有無(wú)無(wú)Download: isoschizomers|compatible ends|single letter code特性
?用于從細(xì)胞和血液中提取高分子量 DNA
?提取純化的 DNA 片段大小達(dá)到 Mb 范圍
?通過(guò)改變裂解過(guò)程中的離心速度，可輕松調(diào)節(jié)提取 DNA 的片段大小
?操作流程簡(jiǎn)單、便捷（細(xì)胞樣品 30 分鐘，血液樣品 60 分鐘）
?獲得的 DNA 產(chǎn)量、純度和完整性極佳
?高效去除 RNA
?快速、高效的洗脫
?包含 RNase A 和蛋白酶 K
?是長(zhǎng)片段測(cè)序的理想選擇
產(chǎn)品說(shuō)明Monarch® 高分子量 DNA 提取試劑盒（細(xì)胞和血液）為從細(xì)胞和血液中提取完整的高分子量（HMW） gDNA 提供了快速的操作流程。該試劑盒利用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)儀器，將以下步驟整合優(yōu)化，加速了提取過(guò)程。實(shí)驗(yàn)流程包括：將細(xì)胞溫和裂解、根據(jù)需要提取長(zhǎng)度不同的 DNA 片段、以及將 DNA 附著于大玻璃珠表面。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)流程提取的 DNA 在 50-250 kb 之間，如果將離心速度降到最低，提取的 DNA 可達(dá) Mb 范圍。純化后的 DNA 產(chǎn)量和純度極高，且?guī)缀跬耆缓?RNA。細(xì)胞樣品的提取時(shí)間僅為 30 分鐘，血液樣本需要紅細(xì)胞裂解，可在 60 分鐘內(nèi)提取完成。A260 / A280 檢測(cè)純度為 1.80-1.90，A260 / A230 檢測(cè)純度為 2.2-2.5，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，純化后的 HMW DNA 適用于多種下游應(yīng)用，包括長(zhǎng)片段測(cè)序（Oxford NanoporeTechnologies®和 PacificBiosciences®），光學(xué)圖譜（BionanoGenomics®）和 Linked-Reads 基因組組裝。 圖 1：使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒從細(xì)胞中提取純化 HMW DNA 的操作流程圖 2：使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒從血液中提取純化 HMW DNA 的操作流程
圖 3：Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒從血液和細(xì)胞中提取 HMW DNA 的重復(fù)性好
使用 Monarch® 高分子量 DNA 提取試劑盒（細(xì)胞和血液）提取 DNA。提取樣品為 1 x 106 新鮮 HEK293 細(xì)胞和 500 µl 新鮮人血樣，按照試劑盒說(shuō)明使用電泳圖上方標(biāo)注的離心速度進(jìn)行制備。從平行試驗(yàn)樣本中分別取 500 ng DNA 產(chǎn)物通過(guò) PFGE 分離（在 BioRad® CHEF-DR® III 系統(tǒng)上，使用 1％ 瓊脂糖凝膠，6 V / cm，13℃ 電泳 20 小時(shí)，切換時(shí)間為 0.5-94 秒）。各樣品的產(chǎn)量和純度見(jiàn)下表標(biāo)注。分子量標(biāo)準(zhǔn)為 Lambda PFG Ladder（NEB＃N0341）。圖 4：在從細(xì)胞和血液中提取 HMW 基因組 DNA 的裂解過(guò)程中，使用不同的離心速度可調(diào)節(jié)提取片段長(zhǎng)度 將 1 x 106 HEK 293細(xì)胞和 500 μl 新鮮人血樣一式兩份提取 HMW DNA。在裂解步驟中，按照?qǐng)D中標(biāo)注的速度離心樣品，以控制 DNA 的片段化。從平行實(shí)驗(yàn)樣本中取等量的 DNA 產(chǎn)物（細(xì)胞：500 ng；血液：650 ng）通過(guò) PFGE 分離（在 BioRad® CHEF-DR® III 系統(tǒng)上，使用 1％ 瓊脂糖凝膠，6 V / cm，13℃ 電泳 20 小時(shí)，切換時(shí)間為 0.5-94 秒）。各樣品的產(chǎn)量、純度和 DIN 值見(jiàn)下表標(biāo)注。分子量標(biāo)準(zhǔn)為 Lambda PFG Ladder 和 Lambda DNA-Hind III 消化 (NEB #T3041 and #N3012) 。圖 5：細(xì)胞和血液樣本上樣量與 DNA 產(chǎn)量的線(xiàn)性相關(guān)性根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作方案，將 HEK293 培養(yǎng)細(xì)胞和來(lái)自不同供體的新鮮人血樣作為樣品提取 HMW DNA 并記錄產(chǎn)量數(shù)據(jù)，裂解步驟中離心速度為 2,000 rpm。將原始樣品稀釋成 5 個(gè)不同的濃度，以覆蓋建議上樣量范圍。細(xì)胞樣品（≤5×105）和血液樣品（<500 µl）使用低樣品量推薦的上樣體積進(jìn)行純化。在測(cè)量范圍內(nèi)，上樣量與產(chǎn)量呈高度線(xiàn)性相關(guān)。
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