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Bio-Rad 1mm 電擊杯感受態細胞操作方法
1. 將1 mm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的電擊感受態細胞插入冰中5 分鐘,待其融化,加入目的DNA (質粒或連接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,避免產生氣泡,立即插入冰中。
3. 用200 μl槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產生氣泡,蓋上杯蓋。
4. 啟動電轉儀,設置參數:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此為BioRad 電轉儀推薦參數,也可按所用電轉儀推薦的參數操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中。
5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入不含抗生素的無菌培養基(室溫),吹吸電擊杯底部數次混勻后,轉移到無菌的離心管中,根據不同菌種的復蘇條件進行復蘇及后續實驗。
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