QIAGEN 12462 DNA質(zhì)粒純化試劑盒Large-Construct Kit
純化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯質(zhì)粒DNA和非基因組DNA
高效去除基因組DNA污染轉(zhuǎn)染級(jí)別純度的高分子量DNA快速簡單的操作
QIAGEN 12462 DNA質(zhì)粒純化試劑盒Large-Construct Kit
Performance
使用QIAGEN Large-Construct Kit純化DNA，無基因組DNA的污染（參見"Efficient removal of genomic DNA"）。基因組DNA的去除確保準(zhǔn)確可靠的進(jìn)行DNA定量，使一些敏感實(shí)驗(yàn)可在明確的和可重復(fù)的條件下進(jìn)行。
Principle
QIAGEN Large-Construct Kit使用經(jīng)優(yōu)化的重力流操作，獲得的DNA的純度顯著高于其他常規(guī)方法獲得的DNA的純度。*的ATP-dependent外切酶消化步驟，確保特異性去除基因組DNA。
QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹脂專為核酸純化設(shè)計(jì)。其出色的核酸分離特性可純化得到高純度DNA，相當(dāng)于經(jīng)過兩次lvfang銫梯度離心得到的純度。預(yù)裝的QIAGEN-tips（參見"Anion-exchange tips"）運(yùn)用重力沉降原理，減少了質(zhì)粒制備過程所需的手工操作時(shí)間。整個(gè)QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用苯酚、lvfang、溴乙錠和氯化銫等有毒物質(zhì)，zui大程度減小了對(duì)使用者及環(huán)境的危害。
Procedure
使用堿裂解法裂解多達(dá)500 ml的培養(yǎng)液后（參見"QIAGEN Plasmid Kit procedures"），使用試劑盒中的ATP-dependent外切酶進(jìn)行消化，確保特異性去除基因組DNA及缺損的高分子量DNA。之后將樣本上樣至陰離子交換柱，在適當(dāng)?shù)牡望}濃度和pH值條件下，質(zhì)粒DNA與樹脂特異性結(jié)合。用中等鹽濃度的緩沖液洗滌，去除RNA、蛋白質(zhì)、代謝物和其他小分子的雜質(zhì)。用高鹽緩沖液洗脫已去除基因組DNA的純化質(zhì)粒DNA。加入異丙醇使DNA濃縮和脫鹽，之后離心收集。
Applications
QIAGEN Large-Construct Kit純化獲得的DNA適用于各種下游應(yīng)用，包括：
亞克隆制備DNA文庫
對(duì)高分子量DNA直接進(jìn)行測序
轉(zhuǎn)染
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