Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)
純化得到至多10mg的無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA
純化得到的DNA內毒素水平低于0.1 EU/µg
純化流程快，同時去除內毒素
獲得高產量、高拷貝質粒DNA
使用LyseBlue，獲得的裂解和高產量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術，可快速制備不含內毒素的質粒DNA。QIAfilter Cartridges過濾快速澄清裂解液，DNA的產量500μg（Maxi）、2.5mg（Mega）和10mg（Giga）。制備的DNA 純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，適合超轉染級純的應用。
原理
純化的質粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法（參見"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟，獲得<0.1EU/µg的質粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設計的過濾裝置，用于代替細菌細胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀，清除細菌裂解液，相比離心可大量節約時間，減少1小時的質粒純化時間。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用內部真空方式輕松高效的清除大量細菌裂解液（注意：該試劑盒不包含瓶子）。
QIAGEN-tips中dute的陰離子交換樹脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專為核酸純化而開發。它的分離性能使得DNA純度與連續兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當。由重力流驅動并持續運轉的預裝 QIAGEN-tips，限度減少手動制備質粒所需的時間。整個QIAGEN質粒純化系統不使用有毒物質，如benfen，氯仿，溴化乙錠和CsCl，限 度地減少對用戶和環境的危害。
內毒素，又稱脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性菌細胞膜的組成部分，如大腸桿菌（參見Bacterial cell wall）。 內毒素在質粒裂解純化過程中釋放出來，并顯著降低內毒素敏感細胞株的轉染效率。此外，內毒素與DNA競爭“自由"轉染試劑，影響轉染實驗中質粒DNA的攝 取。內毒素也誘導巨噬細胞和B細胞等免疫細胞發生非特異性免疫反應，從而導致轉染結果的誤讀。這些反應包括誘導的蛋白質和脂類，如IL-1和前列腺素等的 合成。總體而言，內毒素在轉染實驗中是不可控變量，影響結果的可重復性，使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中，內毒素可造成內毒素休克綜合癥和激活補 體級聯，干擾研究。
Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)
操作流程
在堿性條件下，細菌細胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當的低鹽和pH條件下，質粒DNA選擇性結合。用中鹽緩沖液清除 RNA、蛋白質、代謝產物和其他低分子量雜質，超純質粒DNA被高鹽緩沖液洗脫（參見QIAGEN Plasmid Kit procedures）。最后DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。
應用
使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應用，包括：
轉染，包括原代、敏感以及懸浮細胞
基因治療研究
基因沉默
顯微注射
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