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天恩澤包涵體蛋白溶解及復性套裝 100302-100，產品簡介;
產品品牌：天恩澤
產品名稱：包涵體蛋白溶解及復性套裝
英文名稱：Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit
產品貨號：100302-100
產品規格：100次
產品價格：1490元

天恩澤包涵體蛋白溶解及復性套裝 100302-100

我們上海金山科研平臺公司作為天恩澤公司的代理商，先簡單介紹一下天恩澤公司：

北京天恩澤公司的目標是研發出技術先進、質量穩定、價格合理的試劑精品。公司的創立宗旨是技術至上、質量至上、服務至上，公司的產品研發團隊均為高學歷并在海外有長期的科研經驗；公司的管理團隊已在行業內擁有超過20年管理經驗；同樣，公司的運營團隊也有豐富的執行經驗。

北京天恩澤公司充分了解客戶的需求，并努力創新以滿足客戶不斷發展的需求。我們將與我們的客戶共同成長，成為生物技術領域中zhuoyue產品和服務的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天凈沙、克必隆、歸去來、好亦多均為天恩澤基因注冊商標(試劑類)。

天恩澤包涵體蛋白溶解及復性套裝

天恩澤包涵體蛋白溶解及復性套裝 100302-100，產品簡介;

產品品牌：天恩澤

產品名稱：包涵體蛋白溶解及復性套裝

英文名稱：Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit

產品貨號：100302-100

產品規格：100次

產品價格：1490元

運輸：常溫

保存：常溫

有效期：1年

貨期：1-2天

產品介紹：

包涵體蛋白溶解及復性套裝，提供10種條件供優化

天恩澤包涵體蛋白溶解及復性套裝 100302-100，產品特點：;

E . c o li 作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白 質只完成部分折疊，還沒形成后的正確空間結構，所以沒有生物活性，要得到有 活性的重組蛋白，還需要后續的溶解和復性（重折疊）處理。目前jichangyong的溶解包 涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋 白質被*變性，使后續的蛋白質復性處理效率降低。由于包涵體中的重組蛋白質 已經完成了部分折疊，因此本公司基于此事實設計出了此款溫和溶解-復性試劑盒， 它具有下列特點：

1. 一站式，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質復性的所有試劑。

2. 采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質不*變性，還能保持其部分折 疊的結構，使后續的復性處理效率提高。

3. 所用復性液基于稀釋復性，經過精心優化，有利于大部分蛋白的復性。

4. 還提供五種不同的添加劑，它們可以單獨加入復性液，也可以按一定比例進行 自由組合，以適應不同的蛋白質折疊需求。

5. 本試劑盒提供實惠的小規格，用于做預實驗用，用戶如果選擇到合適的溶液組 合后，可以單獨購買其中任何一個溫和溶液以用于大量制備。

6. 本試劑盒足夠100次小規模（1mL規模）的蛋白質復性實驗。

天恩澤包涵體蛋白溶解及復性套裝

運輸及保存：常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑：去離子水、BCA蛋白濃度測定試劑盒、0.22 um注射器式濾膜

使用方法：

一、洗滌包涵體：用常規方法得到的包涵體常常含有去污劑和細胞碎片，因此需要經過充分的洗滌才能用于本實驗。

1. 將10mg包涵體沉淀溶解在5mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹 打混勻得包涵體懸液。可以適當預留此步得30uL包涵體懸液作為SDS-PAGE 電泳樣品待用。其余的在4℃ 12000 rpm 離心20分鐘，棄上清留沉淀。

2. 重復上面的洗滌步驟3次，每次預留30uL 包涵體懸液作為電泳樣品待用。

3. 將包涵體沉淀溶解在1mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹打混勻 再得包涵體懸液。

4. 檢查包涵體的純度：將上步得到的包涵體懸液和前幾步得到的包涵體懸液一起 用于SDS-PAGE 電泳，檢查每次洗滌去除雜帶的情況。

5. 檢查包涵體的濃度：用自備的BCA蛋白檢測試劑盒測試第4步得到的包涵體 懸液的蛋白質濃度。

6. 將第4步得到的包涵體懸液的蛋白質濃度調到5-10 mg/mL(如果測得值低于 此范圍，則重復本實驗，只是離心后用更少量的洗滌液溶解；如果測得值高于 此范圍，則用適量洗滌液稀釋)，然后將包涵體懸液均分到10個1.5mL塑料 離心管中，每管100 uL。

7. 4℃ 12000rpm 離心20分鐘后棄上清。所得沉淀即純化的、待用的包涵體。

二、確定溶解包涵體的jijia溶解液：

8. 標記上步得到的 10 個離心管，并分別加入 10種包涵體溫和溶解液，每種 1 mL。注意：準確記錄離心管編號和加入溶解液編號的對應關系。

9. 充分振蕩后，室溫放置30分鐘。

10. 450 nm 檢測渾濁度并記錄下數據。

11. 4℃ 12000rpm 離心10分鐘后收集上清，此溶液含有溶解的包涵體蛋白質。

12. 用0.22 um 注射器式濾膜過濾上步所得溶液。280 nm 檢測其光吸收。

13. 溶解液溶解包涵體蛋白的能力跟包涵體溶液濁度跟成反比，跟溶解液OD280 光吸收成正比。根據上面的數據即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體具有jijia溶解能力（OD 值jigao者有大溶解包涵體蛋白的能力），并將選用此溶解液用于下面的復性實驗。本試劑盒提供的10種包涵體溶解液均可以另購。

三．包涵體蛋白的復性：

14. 在2.5 mL 4℃預冷的、處于輕柔攪拌中的復性緩沖液中，逐滴加入上步得到 的OD280數值jigao的包涵體溶解液。

15. 待所有包涵體溶解液都加完后，將包涵體蛋白復性溶液用孔徑為0.22 um 注 射器式濾膜過濾，除去包涵體（直徑一般在0.5-0.8 um）和大的聚合物。 16. 將得到的復性蛋白溶液用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩層析等實驗。

技術資料：

包涵體

包涵體是指細菌表達的蛋白在細胞內凝集，形成無活性的固體顆粒。一般含有 50%以上的重組蛋白，其余為核糖體成份、質粒DNA、脂多糖等，大小為0.5-1um， 難溶于水，只溶于變性劑如尿素、鹽酸胍等。包涵體可以避免蛋白酶對表達蛋白的 降解，其形成降低了胞內表達蛋白的濃度，故有利于表達量的提高。此外，包涵體 中雜蛋白含量較低，且簡單的低速離心就可將其分離純化。后，包涵體對機械攪 拌和超聲破碎不敏感，易于并與細胞膜碎片分離。

包涵體的形成原因之一是重組蛋白表達量過高，表達量越高越容易形成包涵 體。原因可能是合成速度太快，以至于沒有足夠的時間進行折疊，二硫鍵不能正確 的配對，過多的蛋白間的非特異性結合，蛋白質無法達到足夠的溶解度等。原因之 二是重組蛋白含硫氨基酸較多，而脯氨酸的含量也與包涵體的形成呈正相關。此外， 發酵溫度高或胞內pH接近蛋白的等電點也容易誘發包涵體的形成。異源重組蛋白 缺乏翻譯后修飾所需酶類，致使中間體大量積累，也容易形成包涵體沉淀。共表達 分子伴侶的方法可以降低包涵體的形成。

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