BCECF-AM試劑貨號：B262
3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester
CAS號：117464-70-7
商品信息
儲存條件：-20度保存，避光
運輸條件：室溫
分子式：
C35H28O15
分子量：
688.59
特點：
● 水溶性好，可進入細胞膜
● 熒光強度高
選擇規格：
1mg
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規格性狀
規格
特性：該產物為淺橙色至淺橙色棕色粉末或固體，可溶于DMSO和乙腈。
純度(HPLC)：90%以上
熒光光譜：試驗成功
NMR光譜：試驗成功
產品概述
BCECF被廣泛地用于細胞內pH的測定。Tsien博士和其他人通過加入2個額外的羧化物基團改進了這種羧基熒光素。加入的兩個羧基使得它能更好地被固定在細胞內。BCECF具有很好的水溶性，是因為它在中性pH時帶有4-5個負電荷。但是BCECF卻很難穿過細胞膜進入到細胞內。它的pKa值為6.97，高于其它的羧基熒光素。BCECF在激發光譜439nm處有等吸收點，因此它能和Fura 2一樣可用比率法測定。505nm和439nm通常是非常有用的用于比率測量的波長，一般會將490nm和450nm的濾光片加在激發光源的前面。而530nm的濾光片則是用來查看它的熒光信號的。這里要注意的是激發光譜與吸收光譜有一些細微的區別。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF。它能夠輕易地進入到細胞內。就和其他的乙酰甲酯類一樣，BCECF-AM只需要通過孵育就能進入細胞。BCECF-AM對潮濕非常敏感，所以要小心保存。如果DMSO儲存液的顏色從淺黃色變為深橙色就代表了AM的分解。所以通過對顏色變化的觀測，能判斷AM酯的水解情況。
產品特性
BCECF-AM是一種對細胞內pH敏感的新型熒光探針，分別用490nm和440nm波長激發BCECF所得到的發射熒光之比與pH有很好的線性關系。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF，BCECF-AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料，BCECF-AM沒有熒光，進入細胞后被細胞內的酯酶水解成BCECF，從而被留在細胞內。BCECF在適當的pH值情況下可以被激發形成綠色熒光。BCECF-AM不僅被廣泛用于哺乳動物細胞的研究，也有報道用于動物組織、植物細胞、細菌和酵母等的細胞內pH水平檢測。在有細胞內pH變化的細胞毒性、細胞凋亡、細胞粘附、藥物抵抗、細胞趨化等過程中BCECF AM被廣泛應用。BCECF-AM(pH熒光探針)需用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制。
操作說明
試劑 (溶解方法):
1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液(將1 mg 的BCECF-AM溶于1mlDMSO)HEPES緩沖液(20mM HEPES，153mM NaCl，5mM KCl，5mM glucose，pH7.4)
操作：
1.用HEPES制備細胞懸液，細胞濃度為4×107個/ml。
2.將1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液加入細胞懸液中 (細胞懸液的1/300體積)，BCECF-AM終濃度為3mM。
3.37℃培養30min。
4.用HEPES緩沖液清洗細胞3次，制成3×106個/ml的細胞懸液。
5.使用熒光顯微鏡或帶有圖像分析系統的激光共聚焦顯微鏡檢測細胞的熒光強度。
*標記的條件因細胞種類而異，在每次實驗前，請先確定最佳條件。以上方法僅供參考。
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