FDA試劑貨號：F209
Fluorescein diacetate
Fluorescein diacetate
商品信息
儲存條件：0-5度保存，避光
運(yùn)輸條件：室溫
分子式：
C24H16O7
分子量：
416.38
特點(diǎn)：
● 激發(fā)和發(fā)射波長分別為488 nm和530 nm
● 可用于流式細(xì)胞儀
選擇規(guī)格：
1mg
規(guī)格
特性：該產(chǎn)物為白色結(jié)晶粉末或固體，可溶于二甲基亞砜。
可溶于二甲基亞砜：試驗(yàn)成功
NMR光譜：試驗(yàn)成功
產(chǎn)品概述
FDA可透過細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低，因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488 nm和530 nm。
熒光特性
熒光特性：λex=488 nm, λem=530 nm
參考文獻(xiàn)
1) B. Rotman and B. W. Papermaster, “Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 55, 134.
2) H. R. Hulett, W. A. Bonner, J. Barrett and L. A. Herzenberg, “Cell Sorting: Automated Separation of Mammalian Cells as a Function of Intercellular Fluorescence”, Science, 1969, 166, 747.
3) K. H. Jones and J. A. Senft, “An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide”,J.Histochem.Cytochem., 1985, 33, 77.
4) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, “A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1986, 86, 7.
5) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.
6) E. Prosperi, “Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux”, Histochem.J., 1990, 22, 227.
常見問題Q&A
| Q1:如何使用FDA。 |
| A1:下面給出一個例子。請根據(jù)細(xì)胞的種類，觀察條件討論細(xì)胞的固定和試劑濃度。
【例1】HeLa細(xì)胞的形態(tài)觀察
將1mg的FDA溶解在2ml的DMSO中(儲存溶液)
用PBS(-)溶液稀釋，設(shè)為2μmol/L。(用5mlPBS(-)稀釋8μl貯存溶液)
1)用胰蛋白酶-EDTA等回收HaLa細(xì)胞，制備細(xì)胞懸濁液。
2)離心分離細(xì)胞懸濁液(1000rpm,3min)
3)除去上清，添加PBS(-)(此時(shí)細(xì)胞數(shù)為105~106cells/mL)
4)通過粘貼等充分分散。
*因?yàn)榕囵B(yǎng)液中的血清等有使背景上升的危險(xiǎn)重復(fù)②~④的操作充分清洗。
5)在1.5mL微管中添加用4)得到的30μL細(xì)胞懸濁液。
6)在此加入15μL的FDA溶液。
7)蓋上微管，37℃下孵育15min。
8)在玻璃罩上放上7)的溶液10μL，從上面再蓋上一層玻璃，夾入染色的細(xì)胞懸濁液。
9)將蓋杯置于熒光顯微鏡下，用490nm濾光器激發(fā)，觀察發(fā)出黃綠色熒光的活細(xì)胞。
例2:C57BL/6小鼠脾臟細(xì)胞的雙重染色，使用FDA和PI。
k.h.jones,j.a.senft,J.Histochem.Cytochem.，33,77(1985).
將5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(儲備溶液)
將上述0.04mL溶液稀釋為10mlPBS(-)。
PI將1mg溶解在50mlPBS(-)中。
在0.2mLD-PBS溶液中混濁的細(xì)胞(2×106cells/mL)溶液中添加0.1mL的FDA溶液和0.03mL的PI溶液。
孵化后觀察。
【例3】使用HeLa細(xì)胞的細(xì)胞膜離子梯度對Fluorescein溶出的影響
·E.Prosperi,Histochem.J.，22,227(1990).
將5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(儲備溶液)
用PBS(-)，終濃度2.4μmol/L染色。 |
| Q2：細(xì)胞染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長是多少。 |
| A2： |
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