品牌: biomedworld
公司: 沃登醫(yī)學(xué)
提供商： 沃登醫(yī)學(xué) 服務(wù)名稱： 細(xì)胞免疫熒光
產(chǎn)品詳情請聯(lián)系金山科研平臺微信：jinshanbio 細(xì)胞免疫熒光一、細(xì)胞免疫熒光服務(wù)介紹免疫熒光技術(shù)服務(wù)（Immunofluorescence technique）又稱免疫熒光抗體染色，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是基于免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)建立起來的一項技術(shù)。由于抗原-抗體反應(yīng)具有高度的特異性，我們不僅能夠看到待測樣本中目的蛋白的位置，同時也能通過熒光的強(qiáng)度推測反應(yīng)蛋白的含量。如果使用兩種以上的抗體進(jìn)行染色，我們可以觀察到多種蛋白在組織中的分布，以及相互作用關(guān)系等。用于標(biāo)記蛋白的熒光素主要有異硫氰酸熒光黃（FITC），四乙基羅丹明（RB200）和四甲基異硫氰酸羅丹明（TMRITC）。 直接染色法： 將標(biāo)記的特異熒光抗體直接滴加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)過一定時間的染色。洗去多余的熒光抗體，在熒光顯微鏡下便可以觀察到由于抗原抗體結(jié)合而發(fā)出的熒光。此方法操作簡單，實驗流程短。缺點是：一種標(biāo)記抗體只能檢測一種抗原，敏感性略差，使用此方法應(yīng)設(shè)置陽性和陰性對照。 間接染色法： 使用此方法檢測的時候，先用未標(biāo)記的一抗與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)一段時間后洗去多余抗體，再使用標(biāo)記有熒光的二抗抗體與一抗反應(yīng)。如果第一步中的抗原和抗體互相反應(yīng)，則會形成抗原-一抗-二抗的復(fù)合物，再洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗體，在熒光顯微鏡下便能夠看到熒光。二、
細(xì)胞免疫熒光服務(wù)內(nèi)容1.已轉(zhuǎn)染72h的細(xì)胞種于共聚焦專用培養(yǎng)皿里，預(yù)冷PBS洗三遍，每次5分鐘；2.細(xì)胞半干時，覆蓋以4%冷的多聚甲醛固定15分鐘，避光；3.吸去多聚甲醛后，用預(yù)冷PBS洗三遍，每次5分鐘；4.0.5% TritonX-100覆蓋細(xì)胞10分鐘，預(yù)冷PBS洗三遍，每次5分鐘；5.與二抗相同宿主的血清室溫封閉30分鐘；6.配制一抗：SAB + FBS = 1:200；7.加入一抗覆蓋細(xì)胞，錫紙包裹4℃避光過夜；8.取出細(xì)胞復(fù)溫至室溫約1 h；9.冰1‰Tween洗兩次，每次5分鐘，于搖床。冰PBS洗一次，5分鐘，于搖床；10.配制熒光標(biāo)記二抗：用FBS配制，濃度1:200；11.加入二抗，室溫孵育1小時，避光；12.冰1‰Tween洗兩次，每次5分鐘，于搖床。冰PBS洗一次，5分鐘，于搖床；13.DAPI染核，每皿1滴，完全覆蓋住細(xì)胞即可；14.冰1‰Tween洗兩次，每次5分鐘，于搖床。冰PBS洗一次，5分鐘，于搖床；15.加入防熒光淬滅封片劑封片，避光；16.上機(jī)confocol。細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果三、
細(xì)胞免疫熒光 服務(wù)說明1. 簽訂實驗協(xié)議；2. 客戶提供：1） 客戶可以提供已經(jīng)制備但未做進(jìn)一步處理的細(xì)胞爬片、石蠟切片、冰凍切片等；2） 客戶可以提供組織樣品，委托我們完成樣品切片的制備；3）客戶可以自行提供抗體，也可使用公司抗體庫中抗體。3. 實驗周期及服務(wù)費用因樣品的數(shù)量而改變，具體詳詢本公司。四、
細(xì)胞免疫熒光服務(wù)質(zhì)量承諾1．返還未使用的客戶提供的抗體；2．真實的實驗原始數(shù)據(jù)；3．權(quán)威的檢測報告；4．詳細(xì)完整的實驗流程。
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