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品牌: biomedworld 公司: 沃登醫學

提供商： 沃登醫學 服務名稱： RNAi

產品詳情請聯系金山科研平臺微信：jinshanbio
RNAi一、RNAi服務介紹研究表明，將與mRNA同源的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA（dsRNA）導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，從而抑制其相應基因的表達。這種轉錄后基因沉默機制（Post-transcriptional gene silencing, PTGS）被稱為RNA干擾（RNAi）。由于RNAi具有高度的序列專一性，可以特異地使特定基因沉默，獲得功能喪失或降低突變，因此RNAi可以作為一種強有力的研究工具，用于功能基因組的研究。我們應用國外知名公司的RNAi Designer平臺，可對靶基因序列進行干擾位置效應評價和序列同源型分析，完成siRNA/miRNA多種序列的的設計，并提供從siRNA合成、RNAi載體構建到RNAi功能驗證等全面的RNAi解決方案。二、服務內容：1、siRNA合成：對于瞬時基因沉默實驗，化學合成siRNA的方法操作簡便，容易獲得高水平的瞬時沉默效果，特異性強。我們通過嚴格設計來增強siRNA的專一性；針對某靶基因設計的3條siRNA可保證其中兩條的Knockdown效率達到75％（染效率大于80％的情況下）。實驗流程：1）根據序列信息，進行化學合成；2）純化及定量；3）凍干處理；4）細胞轉染預實驗，優化轉染條件；5）瞬時轉染或穩定轉染；6）RT-PCR或Western blot檢測轉染后某一時間點靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。2、質粒載體shRNA的構建：構建shRNA表達載體，實現shRNA在細胞中穩定表達，能夠彌補瞬時轉染持續時間短的不足。實驗流程：1）mRNA序列分析；2）引物設計及合成；3）單鏈互補引物退火；4）將片段克隆至載體；5）測序以確保插入序列正確性；6）向客戶提交測序結果與實驗方法報告單。3、microRNA干擾載體構建：RNAi載體表達可以穩定地研究基因功能，載體在細胞種持續抑制靶基因的表達可達數星期甚至更久。 RNAi載體利用細胞內源性的miRNA加工機制，相比傳統shRNA載體可更高效地表達RNA發夾結構。每個基因設計的4條序列，我們保證至少有2條可以達到至少70％轉錄水平的Knockdown效率（在轉染效率大于80％的情況下）。實驗流程：1）針對特定基因，設計micro RNAi序列，合成該序列并退火生成雙鏈DNA；2）將DNA與載體連接并轉化；3）測序驗證miRNA序列的正確性；4）細胞轉染預實驗，優化轉染條件；5）瞬時轉染或穩定轉染；6）RT-PCR或Western blot檢測轉染后某一時間點靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。4、RNAi干擾效果檢測：應用RT-PCR方法檢測mRNA水平的基因敲除效果；通過Western blot方法檢測蛋白水平的基因敲除效果。三、服務說明1、siRNA合成客戶提供：1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）以及技術要求（包括OD和nmols的精確數量、純化類型和修飾要求等）2）細胞株和詳細的細胞培養的操作步驟3）一抗（如果需要Western blot檢測）注：普通siRNA：均有HPLC純化，100％除去尚未配對的單鏈 ；化學修飾siRNA：利用修飾以提高siRNA在血清和培養基種的穩定性；熒光標記siRNA；siRNA對照：普通陰性對照、熒光標記的陰性對照（易觀察，可觀察轉染效率）和siRNA陽性對照（作為一個實驗系統檢查，確保在您的實驗方法是可靠的；2、質粒載體shRNA的構建客戶提供：待研究mRNA序列信息。3、microRNA干擾載體構建客戶提供：1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）2）細胞株和詳細的細胞培養的操作步驟3）一抗抗體（如果需要Western blot檢測）4、服務價格與周期：四、質量承諾：1、siRNA合成：1）轉染效率分析；2）Knockdown結果。針對靶基因設計的3條siRNA可保證其中2條的Knockdown效率達到75％（在轉染效率大于80％的情況下）。2、質粒載體shRNA的構建：1）陽性克隆質粒；2）陽性克隆甘油菌；3）測序報告以及實驗方法報告。3、microRNA干擾載體構建：1）構建好的表達載體和相應的甘油菌；贈送陰性對照甘油菌；2）測序報告；3）轉染效率分析；4）Knockdown結果。針對某靶基因設計的3條miRNA序列，在轉染效率 > 80％的前提下，我們保證至少有1個克隆可以達到70％轉錄水平的沉默效率服務流程。