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品牌: genelb 公司: 上海晶萊生物技術有限公司

提供商： 晶萊生物 服務名稱： SILAC代謝標記定量實驗服務 規格： 實驗

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實驗技術簡介：SILAC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素 (重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸，細胞經5-6個倍增周期后，穩定同位素標記的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基 酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合，經分離、純化后進行質譜鑒定，根據一級質譜圖中兩個同位素型肽段的面積比較進行相對定量。屬于體 內代謝標記法。實驗操作流程：1、蛋白提取和樣品制備2、標記效率測試3、樣品混合4、SDS-PAGE分級5、酶解6、質譜鑒定7、軟件分析8、定性定量蛋白質組結果9、生物信息學數據挖掘和統計分析實驗注意事項：客戶提供：1、蛋白質提取物：濃度>1μg/μl，蛋白質總量 >300μg2、細胞：通過細胞計數取不少于2×10⁶個細胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱（-80℃，避免反復凍融）交付標準：1、蛋白質鑒定和SILAC定量分析結果；2、顧客指定蛋白質對應的質譜峰圖；3、SILAC實驗完整的實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數等。其他：1、SILAC是體內標記技術，穩定同位素標記的氨基酸與天然氨基酸化學性質基本相同，所標記的細胞和未標記細胞在生物學行為上幾乎沒有差異，標記效率可高達100％。2、采用質譜定量，定量結果準確且批次變異小、重復性好。3、體內代謝標記與SDS-PAGE或色譜分離技術相結合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白性質限制。4、多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定，后續實驗對樣品的影響一致，減少了實驗操作和儀器設備產生的影響。5、由于該技術屬于體內標記，標記效果穩定，其標記效率不受裂解液的影響，不僅適合于進行全細胞蛋白的分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。6、與化學標記相比，SILAC方法蛋白需要量明顯減少，通常每個樣品只需要幾十微克的蛋白量。7、活體標記，更接近樣品真實狀態。8、只適用于活體培養的細胞，對于生物醫學研究中常用的組織樣品，體液樣品等無法分析，對于動物模型的標記成本太大，無法實現。與體外標記技術相比，SILAC屬于體內標記，具有以下技術優勢1、高通量，可同時鑒定并定量數百至數千種蛋白質； 2、定量精確，降低由于樣品制備不同而造成的實驗差異； 3、線性定量范圍廣； 4、靈敏度更高，蛋白質需要量明顯減少；5、標記采用的是體內標記技術，更接近樣品真實狀態。SILAC技術服務內容1、細胞同位素標記；3、SDS-PAGE分離；4、胰酶酶切后液相分離和質譜分析； 5、數據庫檢索及蛋白質定量分析；6、差異蛋白的生物信息學分析7、實驗報告提交。實驗服務報告內容1、蛋白定鑒定和SILAC定量分析結果； 2 、顧客指定蛋白質對應的質譜峰圖； 3、SILAC實驗完整的實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數等。技術服務優勢 1、靈敏度高，檢測限低，可檢測出低豐度蛋白； 2、分離能力強，分析范圍廣，iTRAQ可以對任何類型的蛋白質進行分離鑒定，包括高分子量蛋白質、酸性蛋白和堿性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白； 3、高通量：同時對8個樣本進行分析，提高了實驗通量，可同時對多個時間點或不同處理的蛋白質進行分析； 4、結果可靠：定性與定量分析結果更加可靠； 5、自動化程度高：液相與質譜連用，自動化操作，分析速度快，分離效果好。收費標準/服務周期/提供結果：歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容，或來電咨詢！做實驗，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！【平臺項目開展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學實驗，芯片類實驗，并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI、核心期刊等服務。全國統一咨詢服務熱線:4008-766-085【上海公司】上海市嘉定區槎溪路788弄1號17層【北京公司】北京市大興區科創十四街嘉捷·BDA企業匯16號樓三層【長沙公司】長沙市高新區麓谷大道627號新長海中心B2-403室 【技術咨詢】18500539084【公司郵箱】lab-china@genelb.cn【全國業務咨詢】北京：18810244671 上海：15800916241 長沙：15616228964 武漢：15201856307 西安：13651049420 廣州：18810244571 其他地區：13818286017【晶萊生物】已開展了數千個實驗外包項目。我們專注于醫學課題研究，已從課題申請、方案設計、試劑采購、模型構造、標本檢測、數據分析、以及對SCI撰寫與發表的支持，各個環節積累了數千個成功案例經驗，為數千個來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關實驗服務信息請咨詢晶萊生物