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品牌: genelb 公司: 上海晶萊生物技術有限公司

品牌： Geneline 貨號： - 規格： 真核表達載體構建實驗服務

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一、服務介紹 分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉化與轉導的方式，引入適合的寄主體內得到復制與擴增，然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴增。二、實驗原理 外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。 T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應分為3步：首先，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復合物；然后，酶—AMP復合物再結合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后產生一個新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。 DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。 連接反應的溫度在37℃時有利于連接酶的活性.但是在這個溫度下，粘性末端的氫鍵結合是不穩定的。因此人們找到了一個折中溫度，即12-16℃，連接12-16h(過夜)，這樣既可最大限度地發揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對結構的穩定。三、實驗流程

目的DNA的擴增和純化；連接反應；電泳檢測連接產物。

四、客戶提供樣本DNA，基因序列，試劑盒。五、公司提供構建好的載體，電泳膠圖，測序結果。收費標準/服務周期/提供結果：歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容，或來電咨詢！做實驗，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！【平臺項目開展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學實驗，芯片類實驗，并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI、核心期刊等服務。全國統一咨詢服務熱線:4008-766-085【上海公司】上海市嘉定區槎溪路788弄1號17層【北京公司】北京市大興區科創十四街嘉捷·BDA企業匯16號樓三層【長沙公司】長沙市高新區麓谷大道627號新長海中心B2-403室 【技術咨詢】18500539084【公司郵箱】lab-china@genelb.cn【全國業務咨詢】北京：18810244671 上海：15800916241 長沙：15616228964 武漢：15201856307 西安：13651049420 廣州：18810244571 其他地區：13818286017【晶萊生物】已開展了數千個實驗外包項目。我們專注于醫學課題研究，已從課題申請、方案設計、試劑采購、模型構造、標本檢測、數據分析、以及對SCI撰寫與發表的支持，各個環節積累了數千個成功案例經驗，為數千個來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關實驗服務信息請咨詢晶萊生物