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CRISPR-Cas 技術是繼鋅指核酸酶（ZFN）、ES 細胞打靶和 TALEN 等技術后可用于定點構建基因敲除大、小鼠動物的第四種方法，且有效率高、速度快、生殖系轉移能力強及簡單經濟的特點，在動物模型構建的應用前景將非常廣闊。簡介： 基因敲除動物模型一直以來是在活體動物上開展基因功能研究、尋找合適藥物作用靶標的重要工具。但是傳統(tǒng)的基因敲除方法需要通過復雜的打靶載體構建、ES細胞篩選、嵌合體小鼠選育等一系列步驟，不僅流程繁瑣、對技術的要求很高，而且費用大，耗時較長，成功率受到多方面因素的限制。即使對于技術比較成熟的實驗室，利用傳統(tǒng)技術構建基因敲除大、小鼠一般也需要一年以上。2013 年 1 月份，美國兩個實驗室在《Science》雜志發(fā)表了基于 CRISPR-Cas9 技術在細胞系中進行基因敲除的新方法，該技術與以往的技術不同，是利用靶點特異性的 RNA 將 Cas9 核酸酶帶到基因組上的具體靶點，從而對特定基因位點進行切割導致突變。該技術迅速被運用到基因敲除小鼠和大鼠動物模型的構建之中。通過一系列研究，首先證明了通過 RNA 注射的方式將 CRISPR-Cas 系統(tǒng)導入小鼠受精卵比 DNA 注射能更有效的在胚胎中產生定點突變。在此基礎上，又發(fā)現(xiàn)了該方法沒有小鼠遺傳品系的限制，能夠對大片段的基因組 DNA 進行刪除，也可以通過同時注射針對不同基因的 RNA 序列達到在同一只小鼠或大鼠中產生多個基因突變的效果。此外，還證明了利用 CRISPR-Cas 技術構建的基因敲除大鼠模型與傳統(tǒng)方法構建的同一基因（肥胖相關 G 蛋白偶聯(lián)受體 Mc4R）突變大鼠相比具有一致的表型。該方法構建的基因突變動物具有顯著高于傳統(tǒng)方法的生殖系轉移能力，是一種可靠、高效、快速的構建敲除動物模型的新方法。