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品牌: cobioer 公司: 南京科佰生物科技有限公司

提供商： Cobioer 服務名稱： STR鑒定

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1細胞遺傳質量檢測的重要性很多生物醫藥的研究都采用培養細胞來進行,這些細胞可能是從細胞庫(如美國ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得來,也可能是受贈于其它研究人員。據估計,15-20%的時間里,實驗中所使用的細胞已經不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發生了交叉污染。顯然,細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大地威脅著基于這些細胞而發表的論文的質量和研究發現的正確性。為此,很多細胞庫現在都要對提交來的細胞系進行鑒定,并對細胞系之間的交叉污染進行監測。一些機構已經認識到了交叉污染的問題,如ATCC和FDA,這些機構要求對用于制藥領域的實驗中所使用的材料—諸如細胞系—應該進行“身份鑒定”和純度測試。Nature雜志最近也要求報告新的人類胚胎干細胞系的文章提供STR指紋圖譜數據。此外，FDA建議研究人員在培養細胞的較早階段(細胞培養第一周)來鑒定細胞系的身份。細胞在被凍存前應再一次進行鑒定;對于活躍生長的細胞,每兩個月應鑒定一次;文獻發表前也應對細胞系身份進行鑒定。如果一個實驗室使用不止一種細胞系,則應在實驗最開始時,就要對所有的細胞系進行鑒定,以便排除交叉污染。2基于STR的方法可以輕松、快速地鑒定細胞身份細胞培養中可以使用許多方法對交叉污染進行鑒定,如同功酶分析、染色體組分型、人淋巴細胞抗原(HLA)分型和擴增片段長度多態性(AFLP)的特征分析。但是,比較好的方法是STR圖譜法,在ATCC,STR分析使用的是多重PCR，可以同時擴增8個STR位點加1個性別決定位點Amelogenin。每個被分析的人源細胞系都有其獨特的DNA重復模式,因此通過與基礎圖譜進行比對,即可對每一批新細胞系的身份進行確證。STR方法防止了ATCC將其6個“錯誤”細胞系進一步傳播出去—因為經過STR分型后,發現原本來自女性的細胞系中存在著Y染色體特異的擴增產物。3技術流程3.1STR位點的選擇為了進一步提高鑒定的分辨率，我們除了包含ATCC檢測的8個STR和1個性別決定位點Amelogenin外（表1中藍色字體），另新增了11個高度多態性位點（表1中黑色字體）。表1：STR分型位點TH01AMELTPOXD3S1358D12S391D5S818VWAD13S317D7S820D2S1338D8S1179D6S1043CSF1POD21S11D19S433D16S539FGAD18S51PENTADPENTAE

3.2實驗流程實驗流程簡圖如圖1圖1:實驗流程圖3.3實驗結果3730測序儀檢測結果如圖2圖2:測序儀檢測結果圖4服務流程4.1標準服務流程1)客戶溝通，確認檢測細胞樣本以及樣本數，提示實驗可行性。2)建立實驗方案，并在此過程中和客戶保持密切溝通。3)大規模實驗，有嚴格的指控流程保證實驗結果可靠。4.2實驗數據質量控制流程1)所有分型信號要求信號清晰唯一，排除不確定信號干擾。2)設有陰性對照，質控PCR污染數據。5服務優勢：1)通用熒光引物，大幅降低3730實驗成本。2)數據分析基于3730測序平臺，結果穩定可靠。