品牌: biomics
公司: 百奧邁科生物技術有限公司
提供商： Biomics Biotech 服務名稱： ARCA Cas9 mRNA/sgRNA 規格： 0.5-1μg/μL
產品詳情請聯系金山科研平臺微信：jinshanbio 近10年來，mRNA在醫學應用領域取得顯著進展。研究人員可快速合成任意序列的mRNA片段，并能保存在室溫條件下。在無細胞的體系中利用DNA轉錄生成cap和poly A修飾的mRNA分子穩定性良好，而修飾堿基的mRNA在穩定性上更獲得大幅提升。在研究基因敲除動物及其胚胎發育中的基因表達時，科研人員往往都采用卵母細胞的mRNA顯微注射的方法，該方法在ZFN、TALEN、CRISPR、重編程細胞多能性等技術中得到廣泛應用。在這些基因編輯過程中使用mRNA較之DNA有諸多優點，例如無需進入核內并轉錄效率更快，RNA易降解也避免基因組遺傳重組現象。鑒于此，Biomics Biotech推出mRNA系列產品，提供不同類型的Cas9 mRNA, 例如野生型spCas9 mRNA、單突變spCas9 Nickase mRNA、雙突變spCas9 mutant mRNA。此外我們還提供各種報告基因的mRNA給客戶作為陽性對照，例如Luciferase mRNA，mCHERRY mRNA, GFP mRNA, β-gal mRNA。Biomics Cas9 mRNA 使用本公司自主開發的T7 cap mRNA MICscript? KIT轉錄合成和EzOmicsTM RNA Quick Clear Kit純化，從而使我們的產品成本更低，較客戶購買國外同類產品更具性價比。Cas9 mRNA轉錄DNA模板為線性化質粒，確保無冗余轉錄序列。該質粒中Cas9基因為人源密碼子優化spCas9基因，帶有核轉導域（NLS）及Poly A信號（globin3’ UTR），Cas9 mRNA在細胞內更具穩定性。細胞注射或轉染用mRNA合成還有一個關鍵步驟是5’端的加帽，帽子結構是指在真核生物中轉錄后修飾形成的成熟mRNA在5'端的一個特殊結構，即m7GPPPN結構，又稱為甲基鳥苷帽子。它是在RNA三磷酸酶，mRNA鳥苷酰轉移酶，mRNA（鳥嘌呤-7）甲基轉移酶和mRNA（核苷-2’）甲基轉移酶催化形成的。mRNA 5’-端帽子結構是mRNA翻譯起始的必要結構，對核糖體對mRNA的識別提供了信號，協助核糖體與mRNA結合，使翻譯從AUG開始。帽子結構可增加mRNA的穩定性，保護mRNA免遭5’ →3‘核酸外切酶的攻擊。Biomics使用抗反向帽子類似物(ARCA) m
27,3'-OG[5']ppp[5']在體外產生加帽RNA。在體外的轉錄反應中由于ACRA的m
7G核苷上含有一個3’-O甲基，ACRA可僅被整合到RNA5‘端’正確的方向。因此，ARCA的整合導致加帽RNA的合成比標準帽子類似物（mCAP、CAP）翻譯更加有效。 Biomics mRNA產品濃度為0.5-1μg/μL ，文獻報道中顯微注射的mRNA使用濃度一般為20-200ng/μL 關聯產品：
T7 cap mRNA MICscript? KITEzOmicsTM RNA Quick Clear KitReporter mRNACustom Long RNA Synthesis ServicesReprogramming mRNA
FAQ:
In eukaryotes: the 3’ poly(A) tail confers stability.
A: Most mammalian mRNAs are Polyadenylated
mRNA Decay and Translation
A: The intimate relationship between mRNA decay and translation is further indicated by the ability of translation-initiation factors (
eIF) and proteins (
PAB) that bind the poly (A) tail to protect the mRNA from degradation. Moreover, evidence shows that inhibiting translation elongation promotes mRNA stabilization.Translation initiation complex
What is the rate-limiting step in mRNA degradation?
A: An evolutionarily conserved mRNA-degradation pathway is initiated by the removal of the 3’- poly(A) tail. This disrupts the translation initiation complex and provides degradative enzymes with access to the 5’ cap and remaining RNA body.Reference：
McIvor RS. Therapeutic Delivery of mRNA: The Medium Is the Message，Mol Ther. 2011 May; 19(5):822-3.Warren et al., Highly Efficient Reprogramming to Pluripotency and Directed Differentiation of Human Cells with Synthetic Modified mRNA, Cell Stem Cell (2010), Yang H, Wang H, Shivalila CS, Cheng AW, Shi L, Jaenisch R. One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering. Cell. 2013 Sep 12; 154(6):1370-9.Chang N1, Sun C, Gao L, Zhu D, Xu X, Zhu X, Xiong JW, Xi JJ. Genome editing with RNA-guided Cas9 nuclease in Zabrafish embryos. Cell Res. 2013 Apr; 23(4):465-72.Ma Y, Shen B, Zhang X, Lu Y, Chen W, Ma J, Huang X, Zhang L. Heritable multiplex genetic engineering in rats using CRISPR/Cas9. PLoS One. 2014 Mar 5; 9(3):e89413.Sung YH, Kim JM,Kim HT,Lee J, Highly efficient gene knockout in mice and Zabrafish with RNA-guided endonuclease. Genome Res. 2014 Jan; 24(1):125-31.
CRISPR/Cas9技術討論群：342716231微信號：Biomics-RNAi
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