品牌: wshtbio
公司: 上海萬生昊天生物技術有限公司
貨號： SP004 供應商： 上海萬生昊天生物技術有限公司 規格： 100ml
產品詳情請聯系金山科研平臺微信：jinshanbio 產品簡介：Western及IP細胞裂解液是采用一種非變性裂解方法來裂解細胞，并獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質可以用于PAGE電泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris-HCl、NaCl、低濃度Triton X-100， 低濃度sodium pyrophosphate等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。用萬生昊天Western及IP細胞裂解液得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不宜用Bradford法測定由Western及IP細胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度。產品組成：
編號名稱SP004Western及IP細胞裂解液100 mlPMSF(100mM)1.5 ml
保存條件：-20度保存，12個月有效。注意事項：1. 去除貼壁細胞的培養液時，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。2. 如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。3. 如果細胞量較多，必需分裝成50～100萬細胞/離心管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。4. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。5. 溶解Western及IP細胞裂解液時，應盡量縮短溶解時間，避免裂解液中的有效成分失效。6. 細胞裂解的操作步驟，應置于冰上或4℃進行。使用說明：(一)貼壁培養細胞1. 取Western及IP細胞裂解液置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。2. 去除貼壁細胞的培養液，用PBS、NS或無血清培養液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。3. 按照6孔板每孔加入100～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Western及IP細胞裂解液。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液作用于細胞1～5s內，細胞就會被裂解。4. 10000～12000g，離心3～5min(如果用冷凍離心機4℃離心效果更佳)，取上清。5. 進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(二)懸浮培養細胞1. 取Western及IP細胞裂解液置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。2. 低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。3. 用手指輕彈細胞，使其松散。按照6孔板每孔細胞加入100～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Western及IP細胞裂解液。通常6孔板每孔細胞加入100μl裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150～200μl，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。4. 10000～12000g，4℃離心3～5min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。5. 進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀等操作。(三)組織樣本1. 取Western及IP細胞裂解液置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。2. 把組織剪切成細小的碎片，越小越好。3. 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內，以減少蛋白的降解。4. 按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例，加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30～60min。5. 步驟3、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例加入含有PMSF的Western及IP細胞裂解液。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，過程盡量控制在1～2min之內，以減少蛋白的降解。6. 按照每20mg組織加入100～200μl裂解液的比例，加入含有PMSF的裂解液。7. 10000～12000g，4℃離心10～15min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。8. 進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。相關產品：
產品編號產品名稱包裝SP001蛋白酶抑制劑混合物，100X1mlSP003PMSF（蛋白酶抑制劑）100mM10mlSP007RIPA裂解液(強)100mlSP008胞核-胞漿蛋白制備試劑盒50TGSH2001-12T蛋白預制膠12% 10孔10片/盒
溫馨提示：不可用于臨床治療。
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