詳細描述
高分辨熔解曲線分析（High Resolution Melting analysis，HRM）是利用特定dsDNA染料可以插入DNA雙鏈小溝中的特性，通過實時監測升溫過程中dsDNA解鏈，熒光染料脫落，熒光信號減弱或消失的過程，通過記錄DNA熒光信號強度隨熔解溫度升高的高分辨率變化曲線，得出DNA序列的熔解溫度（Tm）差異，對目的DNA片段堿基配對特異性、突變或多態位點進行檢測。與常規qPCR實驗用SYBR Green I染料標記的熔解曲線分析相比，HRM分析采用的是LC Green, Ly Green, eva Green等飽和染料，不會抑制PCR反應，關鍵是在dsDNA升溫解鏈時，飽和染料從雙鏈上脫落后不再隨機結合到尚未解鏈的雙鏈DNA空閑小溝位置（即染料分子結合位置的重排），因此，其熒光信號減弱能準確反應出雙鏈DNA的熱變性過程樣品的Tm值。
HRM作為一種創新、靈敏、PCR擴增反應后進行的分析方法，可用于PCR擴增產物中基因突變掃描、SNP基因分型、插入或缺失片段的鑒別、短串聯重復序列分析和甲基化比率檢測等多方面研究。
伯樂精確熔點分析軟件Precision Melt Analysis Software與CFX Maestro軟件相結合，使得CFX Duet、CFX Opus 96、CFX Opus Deepwell、CFX Opus 384系列實時定量PCR儀全面支持包括單一基因分型實驗或復雜多板數據研究在內的HRM分析需求。
精確熔點分析軟件用戶界面更友好、功能更優化，使得結果分析非常簡單。大圖標按鈕、實驗向導和新的設置流程，方便新用戶快速開始分析文件。針對有經驗的用戶，軟件可以選擇自定義的數據分析功能，保正更多的實用性和靈活性。
1、主要特點
HRM分析選項管理器功能，即可以應用聚類分析功能，自動分配樣品的基因型，也可以手動自定義設置樣本基因型，應用于每個熔點分析的結果文件；
熔點曲線研究根據熔點曲線圖，不同峰型、曲線漂移，對含有雜合型SNP位點與其他樣本純合子區分。
反應孔分群功能可以從一塊反應板分析多個實驗的數據，每一個分群可以根據各自的設置和分析。
可以根據需要將多次運行的熔點實驗數據合并進行分析，生成標準的熔點曲線分析文庫。無需導出數據即可直接分析實驗數據，數量不受限制，通量大；
多圖表一個窗口顯示功能，一次性利用圖表顯示所有數據，包括擴增曲線圖和分析后的圖譜；
用戶可以自定義需要分析數據和顯示數據，一步就能將任何曲線圖、表格或者圖形導入到EXCEL電子表格、PowerPoint、打印或保存為PDF文件。
精確熔點分析軟件典型HRM工作流程為：
1) 實驗方法：HRM分析匹配試劑
為滿足精確熔點分析欽件需求，需要使用熔點校準試劑盒(1845020)，在CFX OPUS 96和CFX OPUS 384系統上進行一個校準實驗，生成熔點校準文件，導入到精確熔點分析軟件（每個文件與每個儀器特異匹配）。
2）實驗程序
CFX OPUS 96/CFX OPUS 384運行擴增程序及高分辨率熔解曲線程序：
98℃ for 2 min
98℃ for 2 -5 sec
55-60℃ for 2–10 sec (plate read)
Go to step 2, 39 more times
98℃ for，1min
70℃ for，2min
Melt curve 65℃ - 95℃，increment 0.2℃ 10sec hold (plate read)
3) 打開精確熔點分析軟件，導入數據結果文件(.pcrd)，生成.melt文件
4) 分析HRM結果
2、安裝運行計算機配置要求
操作系統： windows 7
處理器：不低于1.0 GHz
RAM內存：不低于2 GB RAM
硬盤和外設：不低于20 GB，USB 2.0高速端口
顯示器分辨率：不低于1024 x 768 x 256真彩色
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